一、臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室區(qū)域設(shè)置原則

(一) 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室原則上分為四個(gè)分隔開(kāi)的工作區(qū)域：

1、試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)

2、標(biāo)本制備區(qū)

3、擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)

4、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)

如使用全自動(dòng)分析儀,區(qū)域可適當(dāng)合并。

(二）各工作區(qū)域須有明確的標(biāo)記，避免不同工作區(qū)域內(nèi)的設(shè)備、物品混用。

(三)進(jìn)入各工作區(qū)域須嚴(yán)格按照單一方向進(jìn)行,即試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。

(四)不同的工作區(qū)域使用不同的工作服(例如不同的顏色)。工作人員離開(kāi)各工作區(qū)域時(shí),不得將工作服帶出。

二、工作區(qū)域儀器設(shè)備配置標(biāo)準(zhǔn)

(一)試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)

1、2～8℃和-15℃冰箱

2、混勻器

3、微量加樣器(覆蓋l～1000ul)

4、移動(dòng)紫外燈(近工作臺(tái)面)

5、消耗品:一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭(帶濾心)

6、專(zhuān)用工作服和工作鞋

7、專(zhuān)用辦公用品(二)標(biāo)本制備區(qū)

1、2～8℃冰箱、-20℃或-80℃冰箱

2、高速臺(tái)式冷凍離心機(jī)

3、混勻器

4、水浴箱或加熱模塊

5、微量加樣器(覆蓋1～1000ul)

6、可移動(dòng)紫外燈(近工作臺(tái)面)

7、超凈工作臺(tái)

8、消耗品:一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭(帶濾心)

9、專(zhuān)用工作服和工作鞋

10、專(zhuān)用辦公用品 如需處理大分子DNA,應(yīng)備有超聲波水浴儀。（三）擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)

1、 核酸擴(kuò)增儀

2、 微量加樣器(覆蓋1～1000ul)

3、 可移動(dòng)紫外燈(近工作臺(tái)面)

4、 消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭(帶濾心) 5、專(zhuān)用工作服和工作鞋

6、專(zhuān)用辦公用品

PCR實(shí)驗(yàn)室建設(shè)四要素

1 試劑準(zhǔn)備區(qū)

用于試驗(yàn)試劑的準(zhǔn)備。該區(qū)域?yàn)檎龎?，目的是防止污染物質(zhì)溢入。該區(qū)域內(nèi)部又可分為3個(gè)區(qū)域：普通提取試劑的準(zhǔn)備區(qū)、PCR試劑準(zhǔn)備區(qū)和PCR主反應(yīng)液準(zhǔn)備區(qū)。在普通提取試劑的準(zhǔn)備區(qū)內(nèi)準(zhǔn)備一些樣品核酸提取時(shí)所需的裂解液、提取液等；PCR試劑準(zhǔn)備區(qū)用于PCR試劑的制備和保存。例如準(zhǔn)備引物、探針等PCR試劑。為了防止交叉污染，避免反復(fù)冷凍和解凍，試劑存貯溶液應(yīng)該被平均為小的工作體積，儲(chǔ)存在這個(gè)房間以備后用：PCR主反應(yīng)液準(zhǔn)備區(qū)將進(jìn)行主反應(yīng)混合液(除了樣品。所有PCR所需試劑的混合)添加到PCR管的操作。重要提示：不能將其它房間的材料(包括擴(kuò)增、模板和目標(biāo)核酸或陽(yáng)性對(duì)照、供應(yīng)品、或設(shè)備)帶進(jìn)試劑準(zhǔn)備區(qū)。

2 樣品準(zhǔn)備區(qū)

該區(qū)域無(wú)壓力設(shè)置要求。該區(qū)域是用于對(duì)樣品進(jìn)行分樣，將樣品進(jìn)行研磨、粉碎、勻漿的區(qū)域。由于在這些粉碎、研磨和勻漿處理過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生氣溶膠，因此，存在陽(yáng)性樣品污染后續(xù)操作的可能性。該區(qū)域與后面的區(qū)域應(yīng)嚴(yán)格隔離，應(yīng)放在與后面的三個(gè)區(qū)域隔開(kāi)的獨(dú)立的房間中。在樣品準(zhǔn)備區(qū)內(nèi)還可設(shè)立一個(gè)專(zhuān)用的封閉區(qū)或房間用于樣品的接收和儲(chǔ)存。這個(gè)房間可以放置冰箱用于樣品儲(chǔ)存，應(yīng)該和樣品準(zhǔn)備區(qū)其它區(qū)域隔離開(kāi)。樣品準(zhǔn)備區(qū)域的人員不得進(jìn)入試劑準(zhǔn)備區(qū)。

3 核酸提取區(qū)

核酸提取區(qū)是進(jìn)行樣品核酸提取的區(qū)域。該區(qū)域?yàn)樨?fù)壓，目的是防止核酸溢出造成污染。樣品準(zhǔn)備區(qū)又包括從樣品中進(jìn)行核酸提取和純化的區(qū)域以及將核酸加到包含PCR主反應(yīng)混合液管中的操作區(qū)域。添加完樣品后，PCR管的蓋子要盡可能快地蓋好。使用PCR板和膠蓋時(shí)，陽(yáng)性對(duì)照和含目標(biāo)序列的樣品要與待測(cè)樣本分開(kāi)操作，以避免模板添加時(shí)造成交叉污染

重要提示：這個(gè)房間里的一切物品不得帶入試劑準(zhǔn)備區(qū)。

4 擴(kuò)增和產(chǎn)品檢測(cè)區(qū)

該區(qū)域是用來(lái)進(jìn)行PCR擴(kuò)增和PCR分析的。PER儀放置在這個(gè)區(qū)域。房間保持負(fù)壓，目的是防止核酸溢出。在該區(qū)域人員一定要一直穿戴工作服

和手套，在離開(kāi)房間前脫去，防止擴(kuò)增子污染其它地點(diǎn)。所有用于擴(kuò)增和產(chǎn)品檢測(cè)的設(shè)備要指定用于這個(gè)房間。PCR分析]二作也設(shè)置在該區(qū)域，例如：酶切、測(cè)序、克隆等，但實(shí)驗(yàn)室應(yīng)盡可能把這些活動(dòng)分隔在不同區(qū)域或不同房間。以降低擴(kuò)增產(chǎn)物的污染風(fēng)險(xiǎn)。如果沒(méi)有條件在該區(qū)域設(shè)立負(fù)壓，此區(qū)域須建立排風(fēng)裝置。

重要提示：這個(gè)房間的物品不能帶入樣品準(zhǔn)備區(qū)或試劑準(zhǔn)備區(qū)。